熒光分光光度計(jì)是一種定性、定量分析的儀器。通過(guò)熒光光譜儀的檢測(cè)，可以獲得物質(zhì)的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率、熒光強(qiáng)度、熒光壽命、斯托克斯位移、熒光偏振與去偏振特性，以及熒光的淬滅方面的信息。

 

熒光分光光度計(jì)的操作步驟：

1.開(kāi)機(jī)：接通電源，打開(kāi)主機(jī)開(kāi)關(guān)，點(diǎn)燃(打開(kāi))光源后,根據(jù)說(shuō)明書(shū)要求啟動(dòng)計(jì)算機(jī)。

2.檢測(cè)前準(zhǔn)備：參照儀器說(shuō)明書(shū),在20天內(nèi)至少進(jìn)行一次激發(fā)校準(zhǔn)和發(fā)射校準(zhǔn)，檢測(cè)前儀器應(yīng)預(yù)熱。

3.工作條件的選擇：環(huán)境溫度應(yīng)在20°C土5°C;相對(duì)濕度不大于70%;電源穩(wěn)定，無(wú)磁場(chǎng)、電場(chǎng)干擾。根據(jù)樣品的特性及熒光強(qiáng)度,選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應(yīng)時(shí)間等)。

4.基本測(cè)定

(1)熒光激發(fā)光譜測(cè)定

設(shè)置儀器參數(shù)，掃描發(fā)射波長(zhǎng)，找到maxhem，以此為發(fā)射波長(zhǎng)，記錄發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)波長(zhǎng)的函數(shù)，便得到激發(fā)光譜。

(2)英光發(fā)射光譜測(cè)定

設(shè)置儀器參數(shù)，掃描激發(fā)波長(zhǎng)，找到maxhex以此為激發(fā)波長(zhǎng)，記錄發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長(zhǎng)間的函數(shù)關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜。

(3)差譜測(cè)定

設(shè)置儀器參數(shù)，選擇合適的工作方式，測(cè)定背景溶液的發(fā)射光譜并儲(chǔ)存起來(lái)，在一定的工作方式下掃描樣品溶液的發(fā)射波長(zhǎng)，得到當(dāng)時(shí)的光度值和儲(chǔ)存的背景值之間的差示值，即差譜。

(4)峰面積積分

選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞?，?duì)樣品溶液進(jìn)行積分操作，即得到峰面積積分。

(5)熒光強(qiáng)度

選擇合適的測(cè)量參數(shù)，設(shè)置入ex、hem，采用定點(diǎn)讀數(shù)或掃描方式，即可測(cè)得所選波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度。

(6)定量測(cè)定

配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在一定的測(cè)定條件下，設(shè)置入ex、入em，按照由稀至濃的次序，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，繪制熒光強(qiáng)度一濃度的工作曲線(xiàn)，不改變儀器參數(shù)測(cè)定未知溶液的熒光強(qiáng)度由工作曲線(xiàn)即可求出未知溶液的濃度。